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        1. RT SuperMix with dsDNase

          貨號:A105-50

          規格:50rxn

          保存:-20℃避光保存兩年

          【產品概述】

          RT SuperMix with dsDNase是將RNA逆轉錄成為cDNA更為簡便的操作系統,含有第一鏈cDNA合成所需的所有試劑,只需加入RNA模板和水即可進行逆轉錄反應。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于文庫構建、第二鏈合成、雜交、PCR擴增、RT-qPCR檢測等。試劑盒中包含新一代的逆轉錄酶和優化的緩沖液,與普通逆轉錄酶系統相比,具有逆轉錄能力強(合成較多全長cDNA)、無RNase H活性、熱穩定性高和半衰期長等優點。該逆轉錄酶產物得率更高,獲得的cDNA片段更長,模板使用范圍更廣等特點。5×Reaction Mix包含逆轉錄反應所需的緩沖液,dNTPs及優化的逆轉錄引物,Supreme Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase,Ribonuclease Inhibitor和dsDNase,以簡化加樣步驟。試劑盒中含有的新型dsDNase,能夠特異性去除雙鏈DNA,而不消化RNA樣品、逆轉錄引物及合成的cDNA,并且具有熱敏感性,可在55℃快速不可逆失活,實現去除基因組污染與逆轉錄反應的同步進行。

          【第一鏈cDNA合成】

          1. 在RNase-free離心管中配制如下混合液,輕輕混勻以下成分:
          Component Volume
          10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*1 As Required
          DEPC-treated Water up to 13 μl
          5×Reaction Mix*2 4 μl
          Supreme Enzyme Mix 3 μl

          *1:為保證逆轉錄成功,請使用高質量RNA模板。

          *25×Reaction Mix在使用前需充分混勻。

          1. 按照下表所示進行逆轉錄反應:
          Temperature Time Note
          25℃ 10 min 隨機引物與RNA模板配對及去除基因組DNA
          55℃ 15 min 逆轉錄反應及dsDNase快速滅活
          85℃ 5 min 逆轉錄酶滅活
          1. 產物可立即用于PCR或qPCR反應,或在-20℃保存,并在半年內使用;長期存放建議分裝后在-70℃保存。cDNA應避免反復凍融。

          【注意事項】

          防止RNase污染:操作時需穿戴手套、口罩和工作服,實驗用的耗材均需保證RNase-free。

          【備注】

          本產品僅供科研使用。在確認產品質量出現問題時,本公司承諾為客戶免費更換等量的合格產品。 在所有情況下,本公司對此產品所承擔的責任,僅限于此產品的價值本身。

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